Nová HPLC-MS/MS metoda pro ultrastopové stanovení steroidních hormonů v subminimálním množství biologického materiálu
Ekdysteroidy představují velmi zajímavou skupinu polyhydroxylovaných steroidů produkovaných mnoha rostlinami a také členovci, kde regulují svlékání, vývoj a reprodukci. Vykazují anabolické vlastnosti u savců a jejich použití jako doplňků stravy se těší velké pozornosti u sportovců, v dostihovém sportu a ve výživě hospodářských zvířat. V naší bioanalytické laboratoři zaměřené na výzkum metabolitů včetně metabolismu lipidů jsme opakovaně narazili na obtíže při ultrastopovém měření ekdysteroidů v komplexních biologických vzorcích, zvláště pokud je k dispozici jen velmi malé množství vzorku. Metabolismus hlavních živočišných ekdysteroidů je navíc velmi individuální v každém jedinci, takže použití spojených vzorků a vzorků neobsahujících ekdysteroidy pro matriční kalibrace představuje náročný problém. Na druhé straně, současný biologický výzkum na molekulární úrovni akutně postrádá spolehlivé metody pro měření těchto hormonů.
Práce autorů Lucie Marešová, Martin Moos, Stanislav Opekar, Michalina Kazek, Clemens Eichler a Petr Šimek publikovaná v časopise Journal of Lipid Research, s názvem A validated HPLC-MS/MS method for the simultaneous determination of ecdysteroid hormones in subminimal amounts of biological material, doi: https://doi.org/10.1016/j.jlr.2024.100640, (IF=5.0, AIS=1.697), popisuje novou originální metodu, která překonává uvedené obtíže a umožňuje validované stanovení ultrastopových množství čtyř hlavních hmyzích ekdysteroidů v minimálním množství biologického materiálu, zejména v submikrolitrových objemech hemolymfy miniaturních jedinců významných členovců (octomilka, kůrovec, komár) a také v mikrolitrových objemech krve savců. Aplikační potenciál metody byl nezávisle ověřen výzkumnými týmy BC, v laboratořích M. Nouzové a M. Jindry, což umožní výzkum molekulárních mechanismů hormonálního vývoje nižších organismů na nové úrovni.
Ilustrační obrázek. Grafický popis nově popsané, ultracitlivé metody pro stanovení ekdysteroidů.
